ਜੈਨੇਟਿਕ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ, ਸਾਨੂੰ ਅਕਸਰ ਨਾਕਾਫ਼ੀ RNA ਨਮੂਨੇ ਮਿਲਦੇ ਹਨ, ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਛੋਟੇ ਸਰੀਰਿਕ ਮੌਖਿਕ ਟਿਊਮਰ, ਇੱਥੋਂ ਤੱਕ ਕਿ ਸਿੰਗਲ-ਸੈੱਲ ਦੇ ਨਮੂਨੇ, ਅਤੇ ਖਾਸ ਜੀਨ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਜੋ ਮਨੁੱਖੀ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਪੱਧਰਾਂ 'ਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਬੇਸ਼ੱਕ, ਕੋਵਿਡ -19 ਟੈਸਟ ਲਈ, ਜੇ ਨਮੂਨੇ ਲੈਣ ਦੌਰਾਨ ਸਵੈਬ ਸਹੀ ਜਗ੍ਹਾ 'ਤੇ ਨਹੀਂ ਹਨ ਜਾਂ ਕਾਫ਼ੀ ਵਾਰ ਨਹੀਂ ਹਨ, ਤਾਂ ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਆਕਾਰ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੋਵੇਗਾ, ਜਿਸ ਕਾਰਨ ਸਿਹਤ ਅਤੇ ਪਰਿਵਾਰ ਯੋਜਨਾ ਕਮਿਸ਼ਨ ਨੇ ਦੋ ਦਿਨ ਪਹਿਲਾਂ ਅਤੇ ਟੈਸਟ ਪਾਸ ਕੀਤਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਜੇਕਰ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਸੈਂਪਲਰ ਨੇ ਛੇ ਨਮੂਨੇ ਨਹੀਂ ਲਏ, ਤਾਂ ਤੁਸੀਂ ਇਸਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹੋ।
ਰੀਐਜੈਂਟ ਦੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਸਾਨੂੰ ਇਹ ਸਮੱਸਿਆ ਜਾਂ ਉਹ ਸਮੱਸਿਆ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਅਸੀਂ RT-PCR ਦੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਸੁਧਾਰਨ ਲਈ ਕੀ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ?
ਇਸ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਕਿ ਅਸੀਂ ਸੰਭਵ ਹੱਲਾਂ 'ਤੇ ਚਰਚਾ ਕਰੀਏ, ਆਓ ਅਸੀਂ ਹੁਣੇ ਜ਼ਿਕਰ ਕੀਤੀ ਸਥਿਤੀ ਨਾਲ ਦੋ ਵੱਡੀਆਂ ਪੇਚੀਦਗੀਆਂ ਦਾ ਜ਼ਿਕਰ ਕਰੀਏ।
ਸਭ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਅਸੀਂ ਆਰਐਨਏ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਬਾਰੇ ਚਿੰਤਾ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਜਦੋਂ ਸਾਡੇ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਸਿਰਫ ਕੁਝ ਸੈੱਲ ਆਬਾਦੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਪਰੰਪਰਾਗਤ ਵਿਭਾਜਨ ਅਤੇ ਸਫ਼ਾਈ ਵਿਧੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਕਾਲਮ ਵਿਧੀ ਜਾਂ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਵਰਖਾ ਵਿਧੀ, ਤਾਂ ਕੁਝ ਨਮੂਨੇ ਖਤਮ ਹੋ ਜਾਣ ਦੀ ਉੱਚ ਸੰਭਾਵਨਾ ਹੈ।ਇੱਕ ਹੱਲ ਇੱਕ ਕੈਰੀਅਰ ਅਣੂ ਨੂੰ ਜੋੜਨਾ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ tRNA, ਪਰ ਫਿਰ ਵੀ, ਇਸ ਗੱਲ ਦੀ ਕੋਈ ਗਰੰਟੀ ਨਹੀਂ ਹੈ ਕਿ ਸਾਡਾ ਰਿਕਵਰੀ ਪ੍ਰਯੋਗ ਠੀਕ ਹੈ।
ਇਸ ਲਈ ਇੱਕ ਬਿਹਤਰ ਤਰੀਕਾ ਕੀ ਹੈ?ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਜਾਂ ਮਾਈਕ੍ਰੋਐਨਾਟੋਮਿਕਲ ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ ਇੱਕ ਵਧੀਆ ਵਿਕਲਪ ਸਿੱਧੇ ਲਾਈਸਿਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਹੈ।
ਇਹ ਵਿਚਾਰ ਹੈ ਕਿ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 5 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਵੰਡਣਾ, ਆਰਐਨਏ ਨੂੰ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਛੱਡਣਾ, ਫਿਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ 2 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਬੰਦ ਕਰਨਾ, ਫਿਰ ਲਾਈਸੈਟ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ ਉਲਟ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਜੋੜਨਾ ਹੈ ਤਾਂ ਕਿ ਕੋਈ ਆਰਐਨਏ ਖਤਮ ਨਾ ਹੋਵੇ, ਅਤੇ ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਸਿੱਟੇ ਵਜੋਂ ਸਿੱਧ ਹੋਏ ਸੀਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਸਿੱਧਾ ਪਾਓ। ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਵਿੱਚ.
ਪਰ ਉਦੋਂ ਕੀ ਜੇ, ਇੱਕ ਸੀਮਤ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਬਿੰਦੂ ਜਾਂ ਟੀਚੇ ਦੇ ਜੀਨ ਸਮੀਕਰਨ ਦੀ ਇੱਕ ਛੋਟੀ ਜਿਹੀ ਮਾਤਰਾ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਅਸੀਂ ਸਾਰੇ ਆਰਐਨਏ ਨੂੰ ਰੀਸਾਈਕਲ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ ਅਤੇ ਫਿਰ ਵੀ ਇੱਕ ਵਧੀਆ ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਸਿਗਨਲ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਟੈਂਪਲੇਟ ਪ੍ਰਦਾਨ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦੇ?
ਇਸ ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ, ਪ੍ਰੀ-ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕਦਮ ਬਹੁਤ ਲਾਭਦਾਇਕ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀ ਯੋਜਨਾ ਹੈ।ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਸਾਨੂੰ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਨੂੰ ਪੁੱਛਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ ਕਿ ਅਸੀਂ ਕਿਹੜੇ ਟੀਚਿਆਂ ਵਿੱਚ ਦਿਲਚਸਪੀ ਰੱਖਦੇ ਹਾਂ, ਤਾਂ ਜੋ ਪ੍ਰੀ-ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਲਈ ਇਹਨਾਂ ਟੀਚਿਆਂ ਲਈ ਖਾਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਣ।
ਇਹ 100 ਜੋੜਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਅਤੇ 10 ਤੋਂ 14 ਵਾਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਚੱਕਰ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਮਿਸ਼ਰਤ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਬਣਾ ਕੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ cDNA ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਇਸ ਲੋੜ ਲਈ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਮਾਸਟਰ ਮਿਕਸ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
10 ਅਤੇ 14 ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਇਹ ਸੀਮਤ ਗਿਣਤੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟੀਚਿਆਂ ਵਿਚਕਾਰ ਬੇਤਰਤੀਬਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਖੋਜਕਰਤਾਵਾਂ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਅਣੂ ਜਾਣਕਾਰੀ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਪ੍ਰੀ-ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਅਸੀਂ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਸੀਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ, ਤਾਂ ਜੋ ਬੈਕ-ਐਂਡ 'ਤੇ ਖੋਜ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸੁਧਾਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ, ਅਤੇ ਅਸੀਂ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਵੀ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ ਅਤੇ ਸੰਭਵ ਬੇਤਰਤੀਬੇ ਗਲਤੀਆਂ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਨ ਲਈ ਕਈ ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ।
ਪੋਸਟ ਟਾਈਮ: ਅਪ੍ਰੈਲ-11-2023